盛元鸿“利糖平”长期毒性实验资料之一
大白鼠口服“利糖平”溶液8周后，眼眶后静脉取血做血液学检查，活杀部分动物，腹主动脉取血做血液生化检测。取脏器心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胃、十二指肠计算脏体比，并作病理学检查。其结果表明各给药组与对照组相比均未显示出有毒理意义的变化，剩下的动物作恢复期的状态与给药期无显著性变化。
“利糖平”属中药复方制剂，属三类新药。用“利糖平”原料粉水溶液对大鼠灌胃8周，观察其毒性反应。
材料和方法：
（一） 药物：
1. 名称：“利糖平”实验用其纯原料药粉
2. 提供单位：美国康利制药公司
3. 配制和保存方法：“利糖平”原料药粉为棕黄色混合药粉，试用前用温水溶化24小时，为棕色混合液，于4℃冰箱保存。
（二） 动物：
1. 来源种类 wistar 大鼠，由美国生物实验室提供。
2. 周龄：5周龄
3. 体重：雄性72.0+6.6g 雌性 67.8+7.7g
4. 性别：雌，雄各半
5. 每组动物数：22只
6. 饲养条件：笼养，每笼5-6只，室温20±2℃
（三）给药剂量：
1. 剂量设置理由：依据急性毒性实验和人用推荐临床用量：
a. 急性毒性实验：小鼠PO LD50>208g/kg
大鼠PO LD50>70g/kg
b. 临床拟用方案，用于,糖尿病治疗，口服一次2g，一天3次，连续用药7天。
参照中药新药毒理等研究指南，（实验药理方法学 第二版）徐淑方编，北京人民卫生出版社出版 1991-1535
设二个剂量组时，高剂量组应为人临床剂量的50倍以上。故设计剂量如下：
|
组别 |
剂量 |
拟用临床剂量的倍数 |
动物数 |
|
对照组 |
0 |
0 |
22 |
|
低剂量 |
2 |
10 |
22 |
|
高剂量 |
10 |
50 |
22 |
2．每只动物给药对照容量：2ml/100g (20ml/kg)
（四）给药途径和周期：灌胃（ig）连续8周
（五）恢复期：二周最后一次给药每活杀14只动物，作血液及血液生化，病理学检查，余下 的8只继续观察，了解毒性反应的恢复情况及可能出现的延迟性毒性。
（六）观察指标
1. 死亡：在实验期间观察动物死亡分布情况
2. 症状：观察动物一般行为活动，腺体分泌，大便性状等，每天记录一次。
3. 体重：每周称二次体重并记录。
4. 进食饮水情况：观察记录动物进食量，饮水量的情况。
（七）实验室检测
1. 血液学：眼眶后静脉业取血作红细胞计数，白细胞读数及血小板及血红蛋白测定。
2. 血液生化：
1). 丙氨酸氨基酸转换微（GPT）赖氏法测定血清中GPT的含量，主要观察肝脏的功能变化。
2). 肌酐含量测定：用苦味酸法测定非蛋白氨的含量（之一）
3). 尿素氮：用二乙酰一肟测定测定血清中尿素的含量，观察药物对动物的肾脏是否有损伤。
4). 总蛋白：用双缩脲法测定，主要观察血浆的变化情况。
5). 白蛋白：用溴甲酚绿与其结合成复合物，比色法测定，用来衡量蛋白营养
6). 麝香草酚浊度测定：主要用于肝脏急性或慢性病的诊断。
3. 病理检查：
1）系统尸检：按常规尸解程序全面而细致的检查。
2）脏器系数：取心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胃、十二指肠，仔细剥离，精确称重（其中肾上腺、胃、十二指肠不称重），并与体重相比，作脏体比较。
3）组织学检查：对照组和高剂量级有异常时才进行。内容如下：
心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胃、十二指肠
（八）恢复期检测：
停药后观察动物的情况，体重变化，一般行为活动，大便性状，进食及饮水情况。了解分析毒性反应的恢复情况和可能出现的延迟性毒性。
（九）常用仪器及统计方法
1． 实验仪器：血球计数仪 cc-180
751 分光光度仪
微聊免疫检测仪
2． 统计方法：用t 检验检测各组间变化均无显著差别。
实验结果：
“利糖平”原粉水溶液（浓度分别为0.1g/ml – 0.5g/ml）对大鼠灌胃，连续8周，严格按上述方法进行。结果如下：
1． 大鼠一般情况：
大鼠灌服高、低剂量的“利糖平”水溶液，行为药理学检查，腺体分泌，大便检查等均未见异常。大鼠一般状态良好，毛色正常，体重呈持续增长趋势，实验过程无死亡，给药组与对照组无明显区别。详见表1。
表1：给药前后体重变化
|
W0 |
W1 |
W2 |
W3 |
W4 |
W5 |
W6 |
W7 |
W8 |
W9 後一周 |
W10 後 2 周 |
||
|
對照組 |
F |
74 ± |
111 ± |
170 ± |
190 ± |
247 ± |
265 ± |
291 ± |
317 ± |
399 ± |
369 ± |
- - |
|
|
6 |
9 |
17 |
22 |
35 |
41 |
48 |
49 |
50 |
33 |
|
|
|
M |
70 ± |
103 ± |
159 ± |
180 ± |
207 ± |
216 ± |
232 ± |
243 ± |
257 ± |
268 ± |
|
|
|
10 |
10 |
11 |
14 |
16 |
18 |
21 |
19 |
22 |
38 |
|||
|
低劑量 |
F |
71 ± |
99 ± |
176 ± |
216 ± |
255 ± |
286 ± |
302 ± |
326 ± |
348 ± |
360 ± |
361 ± |
|
|
8 |
8 |
14 |
19 |
25 |
29 |
38 |
48 |
46 |
48 |
47 |
|
|
M |
66 ± |
97 ± |
151 ± |
162 ± |
196 ± |
213 ± |
217 ± |
236 ± |
247 ± |
253 ± |
257 ± |
|
|
7 |
10 |
12 |
13 |
16 |
20 |
21 |
23 |
27 |
28 |
28 |
||
|
高劑量 |
F |
71 ± |
106 ± |
174 ± |
206 ± |
242 ± |
263 ± |
298 ± |
322 ± |
347 ± |
352 ± |
360 ± |
|
|
5 |
13 |
16 |
21 |
23 |
23 |
35 |
35 |
35 |
35 |
36 |
|
|
M |
69 ± |
96 ± |
143 ± |
166 ± |
186 ± |
186 ± |
219 ± |
234 ± |
231 ± |
238 ± |
246 ± |
|
|
7 |
10 |
12 |
10 |
12 |
12 |
14 |
9 |
12 |
12 |
13 |
(小数点后按4舍5入原则化整)
2. 血液学检查：
给药结束后，检查的血液学五项指标和六项生化指标均在正常范围内，与对照相比未见毒理学意义的变化。详见表2、3。
表2. 血液学检测
|
RBC |
HGB |
PLFC |
WBC |
WBC 分类 % |
||||||
|
（ 106/mm3) |
(g/dl) |
(103/mm3) |
(103/mm3) |
N |
E |
B |
L |
M |
||
|
對照組 |
F M |
8.6 ± 0.4 |
16 ± 1 |
753 ± 95 |
14 ± 3 |
12 ± 7 |
0.4 ± 0.8 |
- - |
87 ± 7 |
1 ± 2 |
|
8.5 ± 0.5 |
16 ± 1 |
775 ± 125 |
13 ± 4 |
16 ± 8 |
0.3 ± 0.8 |
- - |
82 ± 7 |
1 ± 2 |
||
|
8.5 ± 0.5 |
16 ± 1 |
764 ± 107 |
13 ± 3 |
14 ± 8 |
0.4 ± 0.7 |
- - |
84 ± 7 |
1 ± 2 |
||
|
低劑量 |
F M |
8.9 ± 0.6 |
17 ± 1 |
777 ± 127 |
14 ± 3 |
20 ± 9 |
- - |
- - |
78 ± 8 |
2 ± 2 |
|
8.6 ± 0.4 |
17 ± 1 |
747 ± 108 |
13 ± 3 |
22 ± 6 |
- - |
- - |
76 ± 7 |
2 ± 2 |
||
|
8.7 ± 0.5 |
17 ± 1 |
762 ± 114 |
13 ± 3 |
21 ± 7 |
- - |
- - |
77 ± 7 |
2 ± 2 |
||
|
高劑量 |
F M |
8.7 ± 0.5 |
16 ± 2 |
736 ± 65 |
14 ± 2 |
17 ± 7 |
- - |
- - |
82 ± 8 |
1 ± 2 |
|
8.5 ± 0.4 |
16 ± 1 |
797 ± 55 |
13 ± 3 |
28 ± 11 |
- - |
- - |
72 ± 11 |
0 |
||
|
8.6 ± 0.4 |
16 ± 1 |
766 ± 66 |
13 ± 2 |
22 ± 11 |
- - |
- - |
77 ± 10 |
1 ± 2 |
||
表3. 生化指标测定结果：
|
GPT |
BUN |
白蛋白 |
總蛋白 |
肌酐 |
TTT |
||
|
（ U ） |
（ mg/dl) |
（ g/dl) |
（ g/dl) |
（ mg/dl) |
( 濁度） |
||
|
對照組 |
F M |
11.2 ± 1.1 |
13.3 ± 1.7 |
3.4 ± 0.2 |
6.5 ± 0.5 |
1.3 ± 0.2 |
- - |
|
11.7 ± 1.1 |
13.2 ± 1.4 |
3.4 ± 0.2 |
6.5 ± 0.4 |
1.3 ± 0.1 |
- - |
||
|
11.5 ± 1.2 |
13.3 ± 1.5 |
3.2 ± 0.2 |
6.5 ± 0.5 |
1.3 ± 0.2 |
- - |
||
|
低劑量 |
F M |
10.2 ± 1.6 |
12.8 ± 2.2 |
3.5 ± 0.2 |
6.6 ± 0.4 |
1.3 ± 0.2 |
- - |
|
10.7 ± 1.1 |
14.7 ± 1.7 |
3.2 ± 0.2 |
6.5 ± 0.4 |
1.5 ± 0.2 |
- - |
||
|
10.5 ± 1.3 |
13.5 ± 2.0 |
3.3 ± 0.2 |
6.5 ± 0.4 |
1.4 ± 0.2 |
- - |
||
|
高劑量 |
F M |
10.2 ± 1.6 |
12.8 ± 1.8 |
3.3 ± 0.2 |
6.8 ± 0.5 |
1.4 ± 0.2 |
- - |
|
10.7 ± 1.1 |
14.7 ± 1.1 |
3.3 ± 0.2 |
6.3 ± 0.2 |
1.4 ± 0.2 |
- - |
||
|
10.4 ± 1.3 |
13.7 ± 1.7 |
3.3 ± 0.2 |
6.4 ± 0.5 |
1.4 ± 0.2 |
- - |
TTT 实验时浊度为零，絮状反应为阴性
3. 病理学检查：
实验结束后对活杀的动物进行大体解剖，主要脏器观察未见异常，九种脏器的组织病理检查，并未发现异常。六种主要脏器系数列于表4。对照与给药组无显著差异
表4. 脏器系数比较
|
心 |
肝 |
脾 |
肺 |
腎 |
腦 |
|||
|
對照組 |
F M |
0.36 ± 0.02 |
3.06 ± 0.31 |
0.37 ± 0.05 |
0.58 ± 0.12 |
0.68 ± 0.05 |
0.55 ± 0.07 |
|
|
0.41 ± 0.04 |
3.15 ± 0.29 |
0.30 ± 0.03 |
0.65 ± 0.12 |
0.75 ± 0.05 |
0.65 ± 0.05 |
|
||
|
0.38 ± 0.04 |
3.11 ± 0.29 |
0.34 ± 0.05 |
0.62 ± 0.12 |
0.72 ± 0.07 |
0.60 ± 0.08 |
|
||
|
低劑量 |
F M |
0.38 ± 0.03 |
2.98 ± 0.18 |
0.31 ± 0.07 |
0.53 ± 0.07 |
0.73 ± 0.09 |
0.54 ± 0.09 |
|
|
0.4 ± 0.06 |
2.99 ± 0.21 |
0.30 ± 0.05 |
0.67 ± 0.14 |
0.79 ± 0.05 |
0.68 ± 0.05 |
|
||
|
0.39 ± 0.05 |
2.99 ± 0.19 |
0.30 ± 0.06 |
0.60 ± 0.13 |
0.76 ± 0.07 |
0.61 ± 0.10 |
|
||
|
高劑量 |
F M |
0.39 ± 0.02 |
3.03 ± 0.17 |
0.39 ± 0.04 |
0.53 ± 0.04 |
0.66 ± 0.05 |
0.49 ± 0.06 |
|
|
0.45 ± 0.03 |
2.93 ± 0.13 |
0.30 ± 0.02 |
0.65 ± 0.04 |
0.71 ± 0.03 |
0.69 ± 0.09 |
|
||
|
0.42 ± 0.04 |
2.99 ± 0.15 |
0.35 ± 0.06 |
0.59 ± 0.07 |
0.68 ± 0.05 |
0.59 ± 0.13 |
4. 停药后观察结果：
实验给药结束后，部分留存的大鼠继续正常喂养观察两周。在此两周内大鼠的行为活动，腺体分泌等与治疗组相比未见异常，进食饮水良好，体重似呈缓慢增长趋势。与给药组及对照组的增长趋势相近，活杀后组织病理学检查未见异常，说明未有迟发性毒性反应。（由于药液浓度和最大灌胃允许容量的限制，未再增加剂量）。
结论：
“利糖平”原料水溶液以2g/kg, 10g/kg 剂量（相当于人临床剂量的10倍、50倍），给大鼠灌胃连续8周，对大鼠一般无明显影响，血液学，生化学，大体解剂，组织病理学检查均未见异常。大鼠停药后两周状态良好，行为学，组织病理学等检查未见迟发性毒性指症。
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